大鲵糖肽润肤霜的制备及性能评价

通过添加大鲵糖肽制备了润肤霜，探讨了大鲵糖肽的吸湿性与抗氧化性，大鲵糖肽润肤霜的抗紫外线性与豚鼠皮肤涂 抹的变态反应。结果表明: 在低湿度条件下，大鲵糖肽的吸湿率达 3.8% ，在高湿度条件下，大鲵糖肽的吸湿率达 15.6% ; 羟基自由基 清除率为 50.85% ; 添加了大鲵糖肽在 260~315 nm 下具有较强紫外线吸收能力; 涂抹大鲵糖肽润肤霜和大鲵糖肽的豚鼠皮肤没有出 现任何的红斑和水肿，与对照组的豚鼠的皮肤一致。

关键词: 大鲵糖肽; 吸湿性; 抗紫外线; 抗氧化

 

生物活性糖肽是指对生物机体的生命活动有益或具有生理 作用的肽类化合物，是蛋白质中 20 个天然氨基酸以不同组成和 排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的 总称，也是源于蛋白质的多功能化合物。
糖肽的抗氧化活性与其氨基酸序列及糖链组成有着密切的 关系。有研究表明，含有组氨酸的肽可能具有螯合金属。猝灭活性氧和清除羟自由基的能力。另有研究报道氨基酸残基的氧 化是抗氧化肽能够清除自由基的原因之一，但是游离氨基酸并 没有表现出抗氧化活性，因为肽的一级结构是构成其具有抗氧 化作用的必要因素。
以天然成分为化妆品功能性原料，大大提高了有效活性物的浓度。大多数的临床数据表明，天然成分化妆品的疗效明显， 针对性强，丝毫不在合成药物之下。长期使用无副作用或副作 用极小，特别适用于预防性的化妆品和美容品。大鲵糖肽具 有较好的抑菌活性、吸湿保湿性能、抗紫外和抗氧化等特性，它 可以防止皮质层水分损失，保持皮肤的滋润和健康。肽类物质具有生理活性，营养价值高于游离氨基酸，易吸收、溶解度高、粘 性低、有很强的吸湿性，可用作保湿型添加剂生产各种化妆 品。大鲵糖肽能有效地清除活性氧自由基，保护细胞和线粒体的正常结构和功能，防止脂质过氧化的发生，因此，它具有保护皮肤的效果。据此，本文研究了大鲵糖肽的吸湿性与抗氧化性，大鲵糖肽润肤霜的抗紫外线性与豚鼠皮肤涂抹的变态反应。

1 材料与方法

1.1 材料
大鲵糖肽，2009年12 月由张家界（中国）金驰大鲵生物科技有限公司制备; 其他化学试剂均为国产分析纯试剂。豚鼠，购买于大连医科大学动物实验中心。 

1.2 方法

1.2.1 大鲵糖肽吸湿性能的测试
室温下，在干燥器中放置硫酸钠饱和溶液维持相对湿度 （RH）43% ，放置硫酸铵饱和溶液维持相对湿度（RH）为 81% 。 准确称取 0.5 g 干燥后大鲵黏液试样放入直径为 3 cm 的称量瓶 中，再把称量瓶分别放入置有以硫酸钠饱和溶液维持相对湿度 （RH）43% 和以硫酸铵饱和溶液维持相对湿度（RH）81% 的干燥 器中，放置时间 6、12、24、36、48 h，分别称量样品放置前的质量 （mo ）和放置后的质量（mn ），根据下式计算吸湿率: 吸湿率（% ）= （mn － mo）/ mo × 100% 式中: mo 为试样吸湿前质量，mn 为吸湿 48 h 后质量。 
1.2.2 大鲵糖肽抗氧化性能的测试
大鲵糖肽羟基自由基清除活性的测定: H2O2 和铁离子混合发生 Fenton 反应，生成具有很高反应活动的·OH，其可被 2 － 脱 氧核糖有效地捕捉，并生成有色物质; 但若加入具有清除作用的物质，便会于 2 － 脱氧核糖竞争，从而使有色产物生成量减少。 在 10 mL 的试管中依次加入 6 mmol /L 的 FeSO4 溶液 0.4 mL， 6 mmol /L的 2 － 脱氧核糖溶液 0.4 mL，摇匀，分别将试管置37.5 ℃水浴锅中 1 h 后取出放入沸水浴中 10 min，后放入冰水 中冷却10 min。取适量倒入离心管中3 000 r/min 离心10 min 后 在 532 nm 处测定吸光度，根据下式计算清除率: 清除率（% ）= { ［（C － CB ）－ （S － SB）］/（C － CB ）} × 100 式中: C———空白液的吸光度 CB———空白本底液的吸光度 S———加入试样液后的吸光度 SB———本底液吸光度 
1.2.3 大鲵糖肽润肤霜的制备
润肤霜配方如表 1 所示。

表 1 润肤霜配方

将油相原料和油溶性乳化剂如表 1，在不断搅拌下混合加热 至 80 ℃，维持 20 min 灭菌，将水相原料和水溶性乳化剂加入至 蒸馏水中，搅拌下加热至 80 ℃，维持 20 min 灭菌，然后冷却，将大鲵糖肽缓慢加到水相中搅拌乳化，再将水相加入到油相中，当 温度降至 45 ℃时加入香精，继续搅拌冷却成膏。 
1.2.4 大鲵糖肽润肤霜抗紫外线性能表征
分别取大鲵糖肽 0.1 g、0.2 g，各加入 100 mL 蒸馏水，稀释 至 0.1% 和 0.2% ，搅拌至均匀。然后分别各取 3 mL 样液和 3 mL TCA 放置试管中。然后每个样液取 1.5 mL 放置离心管中 在 － 4 ℃以转速 10 000 r/min 离心 20 min。取上清液用紫外可 见分光光度计测抗紫外线能力。 
1.2.5 大鲵糖肽润肤霜稳定性测试 根据 QB/T1684 － 93 标准对试稳定性耐热、耐寒、离心稳定 性实验。 
1.2.6 变豚鼠皮肤变态反应试验 试验前动物要在实验动物房环境中至少适应 3 ～ 5 d。将动 物随机分为受试物组和对照组，按所选用的试验方法，选择适当部位给动物备毛（去毛），避免损伤皮肤。动物数: 试验组为 12 只，对照组为 2 只。试验前约 24 h，将豚鼠背部左侧去毛，去 毛范围为 4 ～ 6 cm。诱导接触: 将受试物约 0.2 mL（g）涂在实验动物去毛区皮肤上，以二层纱布覆盖，再以无刺激胶布封闭固定 6 h。第 7d 和第 14 d 以同样方法重复一次。激发接触: 末次诱 导后 14 ～ 28 d，将约 0.2 mL 的受试物涂于豚鼠背部右侧 2 cm × 2 cm去毛区（接触前24 h 脱毛），然后用二层纱布覆盖，再以无刺 激胶布固定 6 h。激发接触后 24 h 和 48 h 观察皮肤反应。 
1.2.7 大鲵糖肽润肤霜中重金属含量的测定 根据食品中重金属含量的检测依据，检测大鲵糖肽中重金属的含量。 
1.2.8 人体试用安全性评价
按受试者入选标准选择正常男性受试者 15 例，正常女性受 试者 15 例，按照化妆品产品使用特点和方法让受试者直接使用 受试产品。每周 1 次观察或电话随访受试者有无全身性不良反 应如恶心、乏力、月经紊乱及其它不适等，观察涂抹样品部位皮 肤反应，按表 2 皮肤不良反应分级标准记录结果。

表 2 人体试用试验

2 结果与讨论

2.1 大鲵糖肽吸湿率 分别考察了大鲵糖肽样品在两种湿度下随时间的变化而导 致的吸湿率的变化。在低湿度条件下，大鲵糖肽的吸湿率达 3.8% ，在高湿度条件下，大鲵糖肽的吸湿率达 15.6% （图 1）。大鲵糖肽具有一定的吸湿特性。因此，在气候干燥地区，大鲵糖肽润肤霜可起到良好的保湿效果。 

图 1 在高、低湿度条件下大鲵糖肽的吸湿率

2.2 大鲵糖肽抗氧化性能

大鲵糖肽羟基自由基清除率为 50.85% 。自由基是具有高度化学活性的物质，人体内自由基过多或清除过慢，即会引发所 谓的自由基链式反应，导致细胞膜的过氧化，它是引起机体衰老的根本原因。研究所得大鲵糖肽羟基自由基清除率为 50.85% ， 可作为抗衰老化妆品的重要功效成分。 

2.3 大鲵糖肽抗紫外线的性能
在紫外分光光度计上分别于 200 ～ 400 nm 之间测定大鲵糖肽的吸光度值。因为200 ～ 250 nm 属于长波紫外线，对人体皮肤不会造成很大的伤害，315 nm 以上的波长不会穿透大气层，对人 体皮肤也不会造成伤害，所以只有在260 ～ 315 nm 处会对人体皮 肤造成伤害，从上述表格数据和数据线中可以看出，在 260 ～ 315 nm 的高能区域内，吸收曲线出现低谷，说明此波长范围的紫外吸收率较大，说明大鲵糖肽具有一定的抗紫外能力。同时也可 以看出，浓度为 0.1% 的大鲵糖肽水溶液抗紫外线能力最强（图 2）。

图 2 抗紫外能力的检测 1 号: 0.1% 的大鲵糖肽溶液; 2 号: 0.2% 的大鲵糖肽溶液

2.4 大鲵糖肽润肤霜产品稳定性能评价 依据中华人民共和国行业标准 QB/T1684 － 93，对样品进行 耐热、耐寒、离心稳定性测试，结果如表 3 所示。 表 3 结果表明大鲵糖肽润肤霜具有良好的耐热、耐寒性能， 离心测试未出现分层。此配方使用的多为熔点较低的油质原 料，因此膏体软、流动性好，涂抹保湿霜受感觉膏体润湿感好。 

表 3 润肤霜性能测试

2.5 豚鼠皮肤变态试验结果
在涂抹化妆品的试验组中，涂抹化妆品的背部皮肤没有出 现任何的红斑和水肿，在涂抹大鲵糖肽试验组中，涂抹大鲵糖肽的背部皮肤同样也没有出现任何的红斑和水肿，与对照组背部去毛区域基本一致。说明化妆品和大鲵糖肽对动物皮肤没有发生皮肤变态反应，对动物皮肤是无毒的，可以放心使用。 

2.6 结果安全性评价 在 15 例男性例受试者和 15 例女性受试者中没有出现皮肤不良反应，判定受试物对人体没有不良反应。

 3 结 论 
 （1）在低湿度条件（RH = 43% ）下，大鲵糖肽的吸湿率达 3.8% ，在高湿度条件下（RH = 81% ）大鲵糖肽吸湿率达 15.6% ; 
 （2）大鲵糖肽羟基自由基清除率为 50.85% ; 
 （3）在 260 ～ 315 nm 的高能区域内，吸收曲线出现低谷，说明此波长范围的紫外吸收率较大，说明大鲵糖肽具有一定的抗紫外线吸收能力，但是作用不是很大; 
 （4）以大鲵糖肽制备的润肤霜稳定性符合中华人民共和国行业标准QB/T1684－93 的要求; 
 （5）涂抹大鲵糖肽化妆品的豚鼠皮肤没有发生任何的变态反应;
 （6）涂抹大鲵糖肽化妆品的人体受试者没有发生任何不良反应。